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Polysciences 24765-1試劑

Polysciences 24765-1試劑

更新時(shi)間:2024-04-28

產品特點:
Polysciences 24765-1試劑,細胞轉染在基因表達和蛋白質研究領域至關重要。Polysciences 24765-1,作為一種有效的轉染試劑,能夠高效地將DNA引入細胞內。本文將詳細介紹Polysciences 24765-1的使用方法。
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加工定制

一、貼壁細胞轉染:Polysciences 24765-1試劑

以293T細胞(bao)為例,需要精確(que)(que)控制(zhi)轉(zhuan)染(ran)條件以確(que)(que)保*高效率。以下是具體步驟:

細胞(bao)準備:

使用膠原酶處理細(xi)胞(bao)并計數。在6孔板中以每孔2×106細(xi)胞(bao)接種。每孔加入(ru)2 mL新(xin)鮮的(de)(de)DMEM/F12+5%FBS 培養(yang)基(ji)和(he)1 mL的(de)(de)細(xi)胞(bao)懸液,置(zhi)于37℃,5%CO2培養(yang)箱培養(yang)24 h。24 h后,移(yi)除之前培養(yang)基(ji),每孔加入(ru)2 mL新(xin)鮮的(de)(de)DMEM/F12+5%FBS。

轉染過程(cheng):

1.檢(jian)查細胞匯合度,達到70%-80%時開始轉(zhuan)染。

2.分別用(yong)兩份100 µL無血清(qing)培(pei)養(yang)基(ji)稀釋DNA,使(shi)DNA終濃度(du)為(wei)1 µg/ml(DNA/總培(pei)養(yang)體積)和適當比例(li)的適量(liang)Polysciences 24765-1。DNA:PEI 的比例(li)要(yao)依據(ju)自(zi)己實驗摸(mo)索最適比例(li)。

3.將稀釋的Polysciences 24765-1轉(zhuan)染(ran)試劑(ji)與質粒(li)(總體積200 µL)輕輕混勻,室溫孵(fu)育(yu)30 分鐘。

4.PEI-DNA 復合物滴(di)加到細胞培養板每個孔中,輕(qing)搖混勻。注意輕(qing)輕(qing)沿著孔板邊(bian)緣滴(di)入(ru),以(yi)免破(po)壞(huai)細胞的(de)粘附性。

5.將培養(yang)板放入37℃,5%CO2培養(yang)箱培養(yang)中培養(yang)24 h。

結(jie)果觀察:

在24小時(shi)后(hou)使(shi)用熒光顯微鏡觀察轉染效果,超過80%的(de)(de)293T 細胞在轉染后(hou)的(de)(de)24 h可以觀察到綠色熒光。

二、懸浮細胞轉染:Polysciences 24765-1試劑

懸浮細(xi)(xi)胞轉(zhuan)染步(bu)驟略有不同,小規(gui)模轉(zhuan)染時,用新(xin)鮮的培養基(ji)重懸浮,使細(xi)(xi)胞密度達到 1×106cells/mL,如需大規(gui)模轉(zhuan)染細(xi)(xi)胞密度要(yao)到達2-3×106cellsml/mL。

以(yi)293F細胞為例:

細(xi)胞準(zhun)備:

傳代接種于20 mL 懸(xuan)浮(fu)細胞生長培(pei)養基(ji)中(36.5℃,120 rpm,5%CO2 )培(pei)養細胞至1×106 cells/mL的密度,旋緊瓶(ping)口放入搖床(chuang),2~4 小(xiao)時后可以(yi)進行轉染(ran)。

轉染(ran)過程:

1.用1 mL無血清培養基稀釋適(shi)量(liang)的(de)DNA,使(shi)DNA 終濃度為1 µg/ml,混勻并靜置5 min。

2.用1 mLOptiPRO

SFM(無(wu)血清(qing)培養基(ji))稀(xi)釋適當比(bi)例的PEI 40000,混(hun)勻并靜置10 min。

3.將稀釋(shi)的24765-1轉染試劑與(yu)質粒輕(qing)輕(qing)混勻,室溫(wen)孵育(yu)30分(fen)鐘。

4.將PEI-DNA 轉染(ran)復合(he)物逐滴加(jia)入到細胞培(pei)養液中,搖勻(yun)后旋緊(jin)瓶口放回搖床(36.5℃,5%CO2,120 rpm)。

5.基因表達可在24-72小時(shi)后檢測,時(shi)間取決于細胞系和轉基因。



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